ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE ISOENZIMAS DE L-LACTATO: NAD+ OXIDOREDUCTASA (LDH; EC. 1.1.1.27) DURANTE EL DESARROLLO EMBRIONARIO DEL PEZ COMBATIENTE SIAMÉS BETTA SPLENDENS (REGAN, 1909)

Abstract

Se determinó la actividad enzimática de las isoenzimas de L-lactato: NAD+ oxido-reductasa (LDH; EC. 1.1.1.27), en cada una de las etapas del desarrollo embrionario de la especie Betta splendens. Se tomaron 200 huevos en cada estado de desarrollo embrionario (oocito fertilizado, clivajes, blástulas, gástrula y neurula), obtenidos a partir de cuatro parejas de peces sexualmente maduras, además de oocitos sin fertilizar, recolectados a partir de dos hembras. Las muestras de 200 embriones y 200 huevos sin fertilizar se homogeneizaron y centrifugaron durante 15 minutos a 10.000 rpm. A partir de los sobrenadantes, se corrieron las electroforesis en gel de agarosa y se midió la actividad total de LDH por métodos espectrofotométricos. Los electroforegramas, se cuantificaron en un densitómetro a 540 nm para calcular la concentración aproximada de cada banda y posteriormente determinar la actividad específica de las isoenzimas de LDH. Durante el periodo estudiado, LDH-3 y LDH-4 se caracterizaron por presentar la mayor actividad enzimática. LDH-2, se caracterizó por expresarse durante los estadios de gástrula y neurula y presentar la menor actividad.

The enzymatic activity of the L-lactate isoenzymes: NAD+ oxido-reductase (LDH; EC. 1.1.1.27) was determined in each of the stages of embryonic development of the species Betta splendens . 200 eggs were taken in each stage of embryonic development (fertilized oocyte, cleavages, blastulas, gastrula and neurula), obtained from four pairs of sexually mature fish, in addition to unfertilized oocytes, collected from two females. Samples of 200 embryos and 200 unfertilized eggs were homogenized and centrifuged for 15 minutes at 10,000 rpm. From the supernatants, agarose gel electrophoresis was run and total LDH activity was measured by spectrophotometric methods. The electrophoregrams were quantified in a densitometer at 540 nm to calculate the approximate concentration of each band and subsequently determine the specific activity of the LDH isoenzymes. During the period studied, LDH-3 and LDH-4 were characterized by presenting the highest enzymatic activity. LDH-2 was characterized by being expressed during the gastrula and neurula stages and presenting the lowest activity.