Detección inmunológica de alérgenos de ácaros del polvo doméstico en ambientes interiores utilizando anticuerpos aviares - IgY: una herramienta innovadora

Abstract

La tecnología de anticuerpos aviares (IgY) ha surgido como una alternativa para la producción de anticuerpos con fines de inmunodiagnóstico. Recientemente produjimos IgY contra alérgenos de ácaros del polvo del grupo 1 de Dermatophagoides sp (Dsp) y Blomia tropicalis (Bt). Estos alérgenos son importantes agentes de sensibilización que contribuyen a la fisiopatología de la rinitis alérgica y el asma en pacientes asentados en áreas tropicales. El propósito del presente estudio fue explorar la utilidad de los IgY para detectar alérgenos de ácaros en ambientes interiores. Se recolectaron 100 muestras de polvo de colchones de asmáticos residentes en dos ciudades de la costa Caribe colombiana. Se utilizó un ensayo inmunoabsorbente indirecto ligado a enzimas (ELISA) casero para detectar los alérgenos de ácaros usando dos IgY (IgY-PO2 e IgYPO4). Se determinó el límite de detección de los IgY utilizando extractos de cuerpo entero de Dsp y Bt; asimismo, se indagó la especificidad de los IgY frente a un extracto crudo de cucaracha y se determinaron la precisión y la exactitud de las mediciones. Ambos anticuerpos reconocieron alérgenos en los extractos de ácaros, incluso en la concentración más baja probada (0,05 µg/mL), y ninguno reaccionó con el extracto de cucaracha, lo que demuestra su especificidad para los alérgenos de ácaros. Por otro lado, el IgY-PO4 tuvo los mejores resultados de precisión (intraensayo: CV<6,99 %; interensayo: CV≤8,71 %) y exactitud: 80,62 a 100,39 %. Los niveles de alérgenos detectados fueron consistentes con la densidad de ácaros en las muestras. Este estudio destaca la aplicación de IgY-PO2 e IgY-PO4 para la detección de la contaminación por ácaros en ambientes interiores.

IgY technology has emerged as an alternative for antibody production with immunodiagnostic purposes. Recently, we produced avian antibodies (IgY) against group-1 dust mite allergens of Dermatophagoides sp (Dsp) and Blomia tropicalis (Bt). These allergens are important sensitizing agents that contribute to the pathophysiology of allergy rhinitis and asthma in patients living in tropical areas. The purpose was to explore the utility of IgY for detecting dust mite allergens in indoor environments. We collected 100 samples of dust from mattresses of asthmatic individuals living in two cities on the Colombian Caribbean coast. We used an in-home indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect the mite allergens using two IgYs (IgY-PO2 and IgY-PO4). We determined the IgY detection limit using whole body extracts of Dsp and Bt; likewise, IgY specificity was probed against one crude extract of cockroach, as well as the precision and accuracy of measurements. Both antibodies recognized allergens in the mite extracts, even at the lowest tested concentration (0.05 µg/mL); none reacted with the cockroach extract demonstrating their specificity for mite allergens. On the other hand, IgY-PO4 showed the best precision (intra-assay: CV < 6.99%; inter-assay: CV ≤ 8.71%) and an accuracy: 80.62 – 100.39%. Allergen levels detected were consistent with the mite density present in the dust samples. We confirmed the usefulness of IgY-PO2 and IgYPO4 for detecting dust mite pollution in indoor environments.