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Title: Use of monoclonal antibodies in diagnosis of paracoccidioidomycosis: new strategies for detection of circulating antigens
Authors: Gómez, B. L.
Figueroa, J. I.
Hamilton, A. J.
Ortiz, B.
Robledo, M. A.
Hay, R. J.
Restrepo Moreno, Ángela
Issue Date: 1997
Publisher: American Society for Microbiology
Abstract: The precise diagnosis of paracoccidioidomycosis, in most cases, is established by direct methods and indirect immunological tests. The latter method is reliant on the identification of the host's humoral responses, which are usually impaired or absent in patients with severe juvenile forms of the disease and in immunocompromised patients. Determining disease activity or assessing treatment responses by measuring antibody levels is difficult, since antibody titer may remain elevated or persist at stationary levels, even in the presence of clinical improvement. Consequently, there is a need for alternative tests aimed at the identification of circulating antigens. A modification of the standard hybridoma production method was used to raise a panel of murine monoclonal antibodies (MAbs) against the yeast form of Paracoccidioides brasiliensis. Of these, MAb PIB, directed against an 87-kDa determinant, was used to develop an inhibition ELISA (inh-ELISA) capable of detecting as little as 5.8 ng of circulating antigen per ml of serum. Sera from 46 patients with paracoccidioidomycosis or other mycoses and sera from healthy individuals were evaluated by the inh-ELISA; overall sensitivity was 80.4% (37 of 46 paracoccidioidomycosis patients tested positive), and specificity compared with that of normal controls from areas of endemicity was 81.4%. The inh-ELISA detected circulating antigen in 100% of patients with the acute form of paracoccidioidomycosis and in 83.3 and 60% of patients with the chronic multifocal and unifocal forms of paracoccidioidomycosis according to the patients' clinical presentation. These results indicate that the inh-ELISA with MAb PIB is effective in the detection of circulating antigen and that this test may be useful for monitoring responses to treatment and establishing disease prognoses.
El diagnóstico preciso de paracoccidioidomicosis, en la mayoría de los casos, se establece mediante métodos directos y pruebas inmunológicas indirectas. El último método depende de la identificación de las respuestas humorales del huésped, que generalmente están alteradas o ausentes en pacientes con formas juveniles graves de la enfermedad y en pacientes inmunodeprimidos. Es difícil determinar la actividad de la enfermedad o evaluar las respuestas al tratamiento midiendo los niveles de anticuerpos, ya que el título de anticuerpos puede permanecer elevado o persistir en niveles estacionarios, incluso en presencia de mejoría clínica. En consecuencia, existe la necesidad de pruebas alternativas destinadas a la identificación de antígenos circulantes. Se utilizó una modificación del método estándar de producción de hibridomas para generar un panel de anticuerpos monoclonales murinos (MAb) contra la forma de levadura de Paracoccidioides brasiliensis. De estos, el MAb PIB, dirigido contra un determinante de 87 kDa, se usó para desarrollar un ELISA de inhibición (inh-ELISA) capaz de detectar tan solo 5,8 ng de antígeno circulante por ml de suero. Se evaluaron sueros de 46 pacientes con paracoccidioidomicosis u otras micosis y sueros de individuos sanos mediante el inh-ELISA; La sensibilidad general fue del 80,4% (37 de 46 pacientes con paracoccidioidomicosis dieron positivo) y la especificidad en comparación con los controles normales de las áreas de endemicidad fue del 81,4%. El inh-ELISA detectó antígeno circulante en el 100% de los pacientes con la forma aguda de paracoccidioidomicosis y en el 83,3 y 60% de los pacientes con las formas crónica multifocal y unifocal de paracoccidioidomicosis según la presentación clínica de los pacientes. Estos resultados indican que el inh-ELISA con MAb PIB es eficaz en la detección del antígeno circulante y que esta prueba puede ser útil para controlar las respuestas al tratamiento y establecer pronósticos de enfermedad.
URI: https://repositorio.accefyn.org.co/handle/001/1081
ISSN: 0095-1137
Document url: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC230162/
DOI: 10.1128/jcm.35.12.3278-3283.1997
Appears in Collections:DHAC Paracoccidioidomicosis. Diagnóstico

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